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ABO亚型定型卡操作指南

分类：操作指南
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发布时间：2021-12-03
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【概要描述】ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。
对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。

ABO亚型定型卡操作指南

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【试验目的和原理】

ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。

对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。

常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，如果红细胞发生凝集，预期其凝集强度≥2+；只有正反定型结果一致时才能准确定型。

【试验目的和原理】 ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，如果红细胞发生凝集，预期其凝集强度≥2+；只有正反定型结果一致时才能准确定型。 20121212104627668.jpg 然而，有时ABO正定型和反定型会出现结果不一致现象，或阳性反应强度弱于2+。引起正反定型结果不一致因素有：（一）正定型出现弱反应或缺失抗原 1. A亚型、B亚型或AB亚型。 2. 白血病导致A或B抗原减弱。 3. 何杰金病（Hodgkin’s）有时会抑制抗原表达，与白血病类似。 4. 由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗A或抗B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。需要将正定型的红细胞用生理盐水洗涤后再次定型可解决此问题。 5. 骨髓移植 6. 非ABO同型输血（二）正定型红细胞上多余的抗原反应 1. 自身凝集红细胞、抗体致敏红细胞导致。 2. 细胞未洗涤，血浆蛋白引起的假阳性反应。 3. 细胞未洗涤，血浆中存在针对正定型试剂中某种成分的抗体导致。 4. 骨髓移植。 5. 获得性B。 6. B（A）现象。 7. ABO非相合输注。（三）正定型出现混合视野反应 1. 近期输血。 2. 骨髓移植。 3. 异卵双胞胎或双受精卵产生的嵌合体。 4. 胎儿和母体出血。 5. A3亚型。（四）反定型血清中出现弱反应或反应缺失 1. 年龄相关：新生儿以及小于6月龄的婴儿以及老年人。 2. ABO亚型有亚型抗体，如A2、A2B型人的抗A1。 3. 低球蛋白血症（如白血病人、使用免疫抑制剂患者、免疫缺陷患者）。 4. 移植患者使用抗排异药物。 5. 双胞胎或双受精卵产生的嵌合体。（五）反定型出现多余的抗体反应 1. 冷自身抗体。 2. 特异性冷同种抗体。 3. 血清中存在针对试剂红细胞保存液成分的抗体。 4. 某些疾病导致球蛋白水平增高（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、Hodgkin’s 淋巴瘤）引起缗钱状凝集。 5. 输用大分子血浆扩容剂。 6. 非ABO同型的移植。 7. 静脉注射免疫球蛋白。（六）技术方面的错误 1. 血液样本被污染，如混入其他人样本。 2. 被检红细胞的浓度过高或过低。 3. 忘记在反应体系中加入检测样本或试剂。 4. 未按照试剂使用说明进行试验。 5. 离心步骤离心时间不足或离心时间超时。 6. 对试验结果记录或判读不正确。为了解决ABO亚型引起的ABO正反定型不一致以及正定型红细胞上抗原产生弱反应或抗原反应性缺失，可以使用ABO亚型定型卡来辅助血型鉴定。 ABO亚型定型卡系采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起。每卡有八个凝胶管，其中抗A凝胶管灌注了含抗A抗体的凝胶；抗A1凝胶管灌注了含抗A1抗体的凝胶；抗B凝胶管灌注了含抗B抗体的凝胶；抗AB凝胶管灌注了含抗AB抗体的凝胶；抗H凝胶管灌注了含抗H抗体的凝胶；A细胞、B细胞及Ctl管中灌注了不含血型抗体的凝胶，A细胞、B细胞用于检测血浆中的抗体，Ctl管用于自身对照。当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。【ABO亚型定型卡的用途】鉴定红细胞上的ABO抗原，解决亚型引起ABO正反定型不一致、以及正定型红细胞上抗原产生弱反应或抗原反应性缺失的问题。【样本要求】 1. 建议使用抗凝的血样，尤其是EDTA抗凝管采集的血样，需要量2ml。（EDTA抗凝采血管为紫帽管）。 2. 血液样本在采集后48小时以内检测。【所需仪器设备及耗材】 1. ABO亚型定型卡 2. 血型血清学离心机（用于离心分离血浆、洗涤红细胞） 3. 微柱凝胶卡离心机 4. 微量移液枪及吸头【试验操作】一、被检血液样本的处理 1. EDTA抗凝的血液样本离心3000rpm 1分钟，将上清血浆转入一支12×75mm试管中备用，得到压积红细胞。 2. 另取一支12×75mm试管中，加入0.1ml上述步骤1中的压积红细胞，用生理盐水洗涤一次，弃上清，得到压积红细胞。 3. 在一支12×75mm 试管中，加入1ml生理盐水（或LISS液），加入步骤2中得到的压积红细胞10μl，混匀得到0.8~1%的被检红细胞悬液。二、红细胞定型 1. 取ABO亚型定型卡一片，注意检查外观，确保凝胶管的凝胶上层存在液面，凝胶不会干枯。将符合要求的卡进行标记，按照试验需要撕开封口膜。 2. 用微量移液枪分别向每孔样品槽中沿样品槽内壁呈45°角缓慢加入50μl 0.8~1%的被检者红细胞悬液。 3. 在台面交替轻叩卡左下角和右下角，确保所加入的液体在卡的样品槽中呈水平状态，而不是偏向一侧。 4. 将卡放入微柱凝胶卡离心机离心，LB-3000低速离心机第一档离心900rpm 2分钟，再1500rpm 3分钟，判读结果并记录。【结果判读及解释】 1. 反应阴、阳性的判读 20121212104658937.jpg 2. 阴阳性结果解释 (1) 阳性结果：红细胞浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。 (2) 阴性结果：红细胞全部沉于微柱凝胶的底部。 (3) 血型亚型鉴定需要根据正反定型结果来判定，结果判定可参考下表。 20121212104720212.jpg 注：mf=混合视野，w=弱反应。【注意事项】 1. 建议在使用凝胶卡前先离心再应用。 2. 若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡，不可使用。 3. 撕开凝胶卡封口膜时，不能用力过猛，以免造成凝胶微孔间的交叉污染。 4. 样本采集后应尽快检测，若试验需要延迟，应将样本置2~8℃下短期储存。 5. 红细胞悬液的浓度为0.8~1%，浓度过高或过低会影响检测结果。 6. 溶血、脂血、细菌污染等情况的标本会影响检测结果。 7. 血浆或血清标本须充分离心去除纤维蛋白，否则会阻止红细胞在微柱凝胶中的沉降，出现假阳性。 8. 在Ctl孔（自身阴性对照）结果为阳性时，试验结果无效。可能原因是由于被检红细胞已经致敏IgM抗体导致自发凝集，此时可以用DTT将已经致敏到红细胞上的IgM抗体破坏后再行试验。 9. 人源血液样本存在潜在的传染性，凝胶卡使用后按医疗生物垃圾处理。

然而，有时ABO正定型和反定型会出现结果不一致现象，或阳性反应强度弱于2+。引起正反定型结果不一致因素有：

（一）正定型出现弱反应或缺失抗原

1. A亚型、B亚型或AB亚型。

2. 白血病导致A或B抗原减弱。

3. 何杰金病（Hodgkin’s）有时会抑制抗原表达，与白血病类似。

4. 由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗A或抗B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。需要将正定型的红细胞用生理盐水洗涤后再次定型可解决此问题。

5. 骨髓移植

6. 非ABO同型输血

（二）正定型红细胞上多余的抗原反应

1. 自身凝集红细胞、抗体致敏红细胞导致。

2. 细胞未洗涤，血浆蛋白引起的假阳性反应。

3. 细胞未洗涤，血浆中存在针对正定型试剂中某种成分的抗体导致。

4. 骨髓移植。

5. 获得性B。

6. B（A）现象。

7. ABO非相合输注。

（三）正定型出现混合视野反应

1. 近期输血。

2. 骨髓移植。

3. 异卵双胞胎或双受精卵产生的嵌合体。

4. 胎儿和母体出血。

5. A3亚型。

（四）反定型血清中出现弱反应或反应缺失

1. 年龄相关：新生儿以及小于6月龄的婴儿以及老年人。

2. ABO亚型有亚型抗体，如A2、A2B型人的抗A1。

3. 低球蛋白血症（如白血病人、使用免疫抑制剂患者、免疫缺陷患者）。

4. 移植患者使用抗排异药物。

5. 双胞胎或双受精卵产生的嵌合体。

（五）反定型出现多余的抗体反应

1. 冷自身抗体。

2. 特异性冷同种抗体。

3. 血清中存在针对试剂红细胞保存液成分的抗体。

4. 某些疾病导致球蛋白水平增高（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、Hodgkin’s 淋巴瘤）引起缗钱状凝集。

5. 输用大分子血浆扩容剂。

6. 非ABO同型的移植。

7. 静脉注射免疫球蛋白。

（六）技术方面的错误

1. 血液样本被污染，如混入其他人样本。

2. 被检红细胞的浓度过高或过低。

3. 忘记在反应体系中加入检测样本或试剂。

4. 未按照试剂使用说明进行试验。

5. 离心步骤离心时间不足或离心时间超时。

6. 对试验结果记录或判读不正确。

为了解决ABO亚型引起的ABO正反定型不一致以及正定型红细胞上抗原产生弱反应或抗原反应性缺失，可以使用ABO亚型定型卡来辅助血型鉴定。

ABO亚型定型卡系采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起。每卡有八个凝胶管，其中抗A凝胶管灌注了含抗A抗体的凝胶；抗A1凝胶管灌注了含抗A1抗体的凝胶；抗B凝胶管灌注了含抗B抗体的凝胶；抗AB凝胶管灌注了含抗AB抗体的凝胶；抗H凝胶管灌注了含抗H抗体的凝胶；A细胞、B细胞及Ctl管中灌注了不含血型抗体的凝胶，A细胞、B细胞用于检测血浆中的抗体，Ctl管用于自身对照。当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。

【ABO亚型定型卡的用途】

鉴定红细胞上的ABO抗原，解决亚型引起ABO正反定型不一致、以及正定型红细胞上抗原产生弱反应或抗原反应性缺失的问题。

【样本要求】

1. 建议使用抗凝的血样，尤其是EDTA抗凝管采集的血样，需要量2ml。（EDTA抗凝采血管为紫帽管）。

2. 血液样本在采集后48小时以内检测。

【所需仪器设备及耗材】

1. ABO亚型定型卡

2. 血型血清学离心机（用于离心分离血浆、洗涤红细胞）

3. 微柱凝胶卡离心机

4. 微量移液枪及吸头

【试验操作】

一、被检血液样本的处理